Ein Polyacrylamid- Gel wird mit Schlitzen im darauf vorbereitet. Das Gel wird durch Gießen eines heißen flüssigen Polyacrylamid- Lösung in einen flachen Kastens ausgebildet . Die Box sollte eine kammartige Struktur mit Zähnen , die in die Lösung darauf enthalten . Das Polyacrylamid -Gel wird zu einem bald , nachdem sie gegossen wurde und der Kamm entfernt, um rechteckige Löcher offenbaren.
Natriumdodecylsulfat (SDS)
Das Protein wird mit behandelt Natriumdodecylsulfat (SDS) , um die Untereinheiten eines großen Protein so jede denaturieren können separat gemessen werden. Die Vorteile davon sind , dass der SDS gibt die Polypeptide eine negative Ladung , so dass sie in Richtung der negativen Ende oder Anode wandern , des Gels. Zweitens macht die SDS sicher, dass alle Untereinheiten die gleiche Ladung haben und daher werden alle im Gel wandern nach ihrer Molekülmassen statt Kosten.
Zugabe von Protein
Eine geringe Menge von DNA oder Proteinen in einer der rechteckigen Öffnungen an einem Ende des Gels plaziert . Ein elektrischer Strom durch das Gel bei neutralem pH ausgeführt . 10 ul einer DNA-Leiter sowie zwei Steuerelemente auch in das Gel geladen. Die DNA-Leiter wird verwendet, um Mess , wie weit die Probe bewegt in den Prozess der Elektrophorese zu ermöglichen.
Elektrophorese
Die Maschine wird dann eingeschaltet, um 100 Volt und lassen 30 Minuten laufen lassen . Nachdem die Proben 30 Minuten lang einer Elektrophorese unterzogen worden ist, werden das Gel zusammen mit einem Behälter entnommen und in einer Färbewanne für etwa drei Minuten angeordnet . Diese wird dann durch Anordnen des Gels im warmen Wasser für fünf Minuten. Das Gel ist jetzt bereit, auf den Licht-Box , um die Bewegung der DNA-Fragmente zu beobachten platziert werden.
Andere Überlegungen
Bei der Betrachtung des Gels unter dem Licht , sollten einige wichtige Dinge berücksichtigt werden . Eine Zelle kann entweder heterozygot oder homozygot für je nachdem, ob die Kopie vorhanden ist oder nicht in beiden Kopien vorhanden sind oder in nur einer ist der Gen sein. Die heterozygoten Ergebnis kann als eine einzelne Bande erscheinen, weil die Segmente von DNA, die amplifiziert werden effizienter dunkler Gel erscheinen . Ein Farbstoff wird auch während und nach der Elektrophorese hinzugefügt , so dass jedes Polypeptid gesehen werden kann.