- Horatio Caines Frau Marina, gespielt von Sofia Milos: Marina Caim war in den ersten Staffeln der Serie Horatios Frau. Sie war ursprünglich eine Privatdetektivin, die Horatio in einigen Fällen half. Ihre Ehe scheiterte jedoch schließlich an Horatios Hingabe an seine Arbeit.
- Calleigh Duquesne, gespielt von Emily Procter: Calleigh Duquesne ist CSI Level 3 und die Tochter eines Polizisten aus Miami. Sie ist eine erfahrene forensische Wissenschaftlerin und bekannt für ihre Expertise in der DNA-Analyse und der Identifizierung von Schusswaffen.
- Natalia Boa Vista, gespielt von Eva LaRue: Natalia Boa Vista tritt dem Team in Staffel 5 als CSI Level 2 bei. Sie ist eine ehemalige verdeckte Polizistin und verfügt über einen Hintergrund in Psychologie, der ihr hilft, die Beweggründe von Kriminellen zu verstehen.
- Delkos Frau, Marisol Delko, gespielt von Elizabeth Berkley Lauren: Marisol Delko ist Eric Delkos Frau. Sie heiraten im Staffelfinale der vierten Staffel. Marisol arbeitet auch als Ermittlerin bei der Mordkommission in Miami.
- Yelina Salas, gespielt von Sofia Vassilieva: Yelina Salas schließt sich dem Team in Staffel 9 an. Sie ist die Tochter eines russischen Gangsters und verfügt über Kenntnisse über das Innenleben krimineller Organisationen.