Die ersten Auftritte des Ensembles fanden im The Theatre und The Curtain statt, zwei Schauspielhäusern in Shoreditch, etwas außerhalb der City of London. Im Jahr 1599 zog das Ensemble in das neu errichtete Globe Theatre am Südufer der Themse um, das zu ihrem Hauptspielort wurde.
Die Lord Chamberlain's Men waren für ihr talentiertes Schauspielerensemble bekannt, darunter Burbage, der als einer der größten Schauspieler seiner Zeit galt. Kempe war ein bekannter Komiker, während Heminges für seine Darstellung tragischer Rollen bekannt war. Es wird angenommen, dass Shakespeare selbst in einigen seiner Stücke mitgewirkt hat, obwohl die genauen Rollen, die er spielte, nicht sicher bekannt sind.
Das Repertoire des Ensembles umfasste ein breites Spektrum an Theaterstücken, von Komödien und Historien bis hin zu Tragödien und Liebesromanen. Shakespeares Werke bildeten einen bedeutenden Teil des Repertoires des Ensembles und viele seiner Stücke, darunter „Hamlet“, „Othello“ und „King Lear“, wurden von den Lord Chamberlain’s Men uraufgeführt.
Das Unternehmen tourte außerdem ausgiebig durch England und trat in verschiedenen Städten auf. Dies trug dazu bei, Shakespeares Stücke und die Popularität des Theaters über London hinaus zu verbreiten.
Im Jahr 1603, nach dem Tod von Königin Elizabeth I. und der Thronbesteigung von König James I., erhielt das Unternehmen ein königliches Patent und wurde als „King's Men“ bekannt. Sie traten weiterhin im Globe Theatre auf, bis es 1613 durch einen Brand zerstört wurde. Nach der Zerstörung des Globe zog die Gruppe ins Blackfriars Theatre, wo sie auftraten, bis der Englische Bürgerkrieg 1642 alle Theater schloss.
Trotz der Herausforderungen und Veränderungen, mit denen sie im Laufe der Jahre konfrontiert waren, spielte Shakespeares Schauspieltruppe eine entscheidende Rolle für die Entwicklung und den Erfolg des englischen Renaissance-Theaters. Ihre Aufführungen von Shakespeares Stücken trugen dazu bei, ihn zu einem der größten Schriftsteller aller Zeiten zu machen.