Unerwiderte Liebe ist ein wiederkehrendes Thema im Stück, da mehrere Charaktere in jemanden verliebt sind, der ihre Zuneigung nicht erwidert. Viola ist zum Beispiel in Herzog Orsino verliebt, der wiederum in Olivia verliebt ist. Olivia wiederum ist in Cesario verliebt (der eigentlich die verkleidete Viola ist). Dadurch entsteht ein komplexes Netz unerwiderter Liebe, das einen Großteil der Action und des Humors des Stücks bestimmt.
Auch die falsche Identität ist ein zentrales Merkmal des Stücks. Viola verkleidet sich als Mann namens Cesario, um in Orsinos Dienste zu treten. Diese Verkleidung führt zu einer Reihe von Missverständnissen und Komplikationen, da andere Charaktere Viola für einen Mann halten und sich in sie verlieben. Die falsche Identität bietet Viola auch die Möglichkeit, die anderen Charaktere zu beobachten und zu kommentieren, was zum Humor des Stücks beiträgt.
Insgesamt sind unerwiderte Liebe und falsche Identität zwei Hauptmerkmale, die zum Humor und der Komplexität von Twelfth Night beitragen.