Matilda: Eine schöne junge Frau, die das Objekt von Ambrosios Begierde ist. Sie wird schließlich von Ambrosio getötet, nachdem sie ihn abgelehnt hat.
Agnes: Eine junge Nonne, die Ambrosios Schülerin ist. Sie wird von Ambrosio verführt und schwanger. Sie stirbt schließlich an den Folgen der Geburt.
Don Raymond: Der Abt des Klosters, in dem Ambrosio lebt. Er ist ein weiser und gerechter Mann, der Ambrosio hilft, seine Versuchungen zu überwinden.
Donna Elvira: Eine wohlhabende und mächtige Frau, die Ambrosios Geliebte wird. Sie verrät ihn schließlich und übergibt ihn der Inquisition.
Der Inquisitor: Ein mächtiger und rücksichtsloser Mann, der den Prozess gegen Ambrosio leitet und ihn schließlich zum Tode verurteilt.